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臺(tái)盼藍(lán)染色原理

臺(tái)盼藍(lán)（Trypan blue）是一種細(xì)胞活性染料，常用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和細(xì)胞活力檢測(cè)。它可以通過(guò)細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞，并與細(xì)胞內(nèi)的核酸結(jié)合，使細(xì)胞呈現(xiàn)藍(lán)色。對(duì)于喪失活性或細(xì)胞膜不完整的細(xì)胞，其細(xì)胞膜通透性增加，臺(tái)盼藍(lán)染料可以進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)，使細(xì)胞染成藍(lán)色。通過(guò)觀察被染成藍(lán)色細(xì)胞的數(shù)量，即可得出對(duì)應(yīng)的細(xì)胞濃度。

細(xì)胞計(jì)數(shù)的操作流程

1-準(zhǔn)備工作

·準(zhǔn)備細(xì)胞懸液：將待檢測(cè)的細(xì)胞培養(yǎng)至適當(dāng)濃度，收集細(xì)胞并制備成細(xì)胞懸液。

·準(zhǔn)備臺(tái)盼藍(lán)染料：將0.4臺(tái)盼藍(lán)染料用PBS緩沖液稀釋至0.2%。

·準(zhǔn)備細(xì)胞計(jì)數(shù)儀和計(jì)數(shù)板：使用全自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（JSY-SC-031H）和血細(xì)胞計(jì)數(shù)板、蓋玻片進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

·準(zhǔn)備移液器和吸頭：使用移液器和吸頭吸取細(xì)胞懸液和臺(tái)盼藍(lán)染料。

2-加入臺(tái)盼藍(lán)染料

·取適量的細(xì)胞懸液與離心管中。

·加入等量的臺(tái)盼藍(lán)染料（0.2%），再用移液槍輕輕吹打混勻。

3-上機(jī)檢測(cè)

·用移液器取10uL細(xì)胞混合液，加入血細(xì)胞計(jì)數(shù)板中。

·將加樣后的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板放至細(xì)胞計(jì)數(shù)儀（JSY-SC-031H）的載物臺(tái)上，選擇對(duì)應(yīng)的計(jì)數(shù)模式，即可開(kāi)始細(xì)胞計(jì)數(shù)分析（濃度計(jì)算公式=（四個(gè)大方格內(nèi)細(xì)胞數(shù)之和）/4×（稀釋倍數(shù)）×10⁴）。

4-查看結(jié)果數(shù)據(jù)

計(jì)數(shù)完成后，點(diǎn)擊數(shù)據(jù)詳情，查看細(xì)胞濃度、細(xì)胞直徑、細(xì)胞聚團(tuán)率等數(shù)據(jù)。

注意事項(xiàng)

1-臺(tái)盼藍(lán)染料具有一定毒性，操作時(shí)需佩戴手套和口罩，避免接觸皮膚和吸入氣體。

2-臺(tái)盼藍(lán)染料需避光保存，避免陽(yáng)光直射。

3-臺(tái)盼藍(lán)染料適用于大多數(shù)細(xì)胞類型，但無(wú)法很好的區(qū)分細(xì)胞和雜質(zhì)，因此不適用于原代細(xì)胞、PBMC等含有大量雜質(zhì)碎片的細(xì)胞類型。

4-加樣前，可將臺(tái)盼藍(lán)靜置數(shù)分鐘，取上層。

5-加樣時(shí)，應(yīng)盡量避免氣泡的產(chǎn)生，以免影響細(xì)胞計(jì)數(shù)的結(jié)果。

臺(tái)盼藍(lán)染料是一種常用的細(xì)胞活性染料，可用于細(xì)胞計(jì)數(shù)和活力檢測(cè)。在使用臺(tái)盼藍(lán)染料進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)時(shí)，需要注意操作流程和注意事項(xiàng)，以確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。